ции - сопоставить сведения о прививках во всех

ции - сопоставить сведения о прививках во всех учетных формах на выявленных серонегативных лиц для установления факта наличия прививки;
- уточнить, не перенес ли кто-то из обследуемых какого-либо острого заболевания вскоре после прививки ЖКВ или за 1-1,5 месяца до обследования, не получал ли иммуноглобулин вскоре после прививки ЖКВ и др. Оценить условия хранения вакцины, серию препарата.
2. Дополнительно проверить состояние иммунитета к кори у лиц того же возраста , но в 2 других коллективах, курируемых ЛПУ, где выявлен высокий процент серонегативных лиц.
Если после дополнительного обследования количество незащищенных к кори будет превышать приведенный критерий, следует решать вопрос о тактике иммунопрофилактики в этих коллективах. Для этого необходимо обследовать детей других возрастных групп по усмотрению эпидемиолога. Если среди них доля серонегативных к вирусу кори не будет превышать вышеприведенного показателя, то дополнительным прививкам в обследуемых коллективах и ЛПУ, к которым прикреплены данные учреждения, подлежат лишь дети и подростки того возраста, где выявлен высокий процент серонегативных лиц. Если процент серонегативных среди обследованных окажется значительно выше 10%, то следует решать вопрос о дополнительных прививках всем детям данного ЛПУ.
Если высокий процент серонегативных лиц выявлен в коллективах детей или подростков в 2 ЛПУ района, то для оценки прививочной работы в данном районе необходимо провести серологическое обследование индикаторных групп в других ЛПУ этого района.
Однако для принятия управленческих решений по расширению мероприятий по учреждениям, курируемых ЛПУ, или по округу в целом необходимо дополнительное согласование с Центром госсанэпиднадзора в г. Москве.
Серологический мониторинг состояния противокоревого иммунитета осуществляется территориальным центром госсанэпиднадзора совместно с органами управления здравоохранения в административном округе, на которые возлагаются функции отбора контингентов на плановое обследование, сбор сывороток крови в индикаторных группах населения и доставка их в Центр госсанэпиднадзора в г. Москве.
Срок, в течение которого сыворотки собираются и доставляются в региональный центр, не должен превышать 7 дней.
Сыворотки крови направляются на исследование в лабораторию регионального центра с сопроводительным документом .
Отделение вирусологии микробиологической лаборатории регионального центра исследует сыворотки в течение 7-10 дней с момента их поступления и направляет результаты исследования в ЦГСЭН административного округа.
Центр госсанэпиднадзора административного округа в течение 3-5 дней после получения результатов серомониторинга организует проведение вакцинации ЖКВ выявленных серонегативных лиц, в том числе ревакцинированных. Отчет о проведенной вакцинации по предложенной форме направляется в Центр госсанэпиднадзора г. Москвы до 15 января года, следующего за отчетным.

Приложение 15
к приказу Центра
госсанэпиднадзора в г. Москве
от 30 мая 2003 г. N 111

ПРАВИЛА
СБОРА, ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ ОБРАЗЦОВ
СЫВОРОТКИ И ВИРУССОДЕРЖАЩИХ МАТЕРИАЛОВ

1. Сбор, хранение и транспортировка образцов сыворотки крови

Для лабораторной диагностики кори используются серологические методы исследования, основанные на выявлении вирусспецифических антител в одной или парных сыворотках крови.
В лабораторной сети Европейского региона для диагностики кори рекомендуют использовать метод иммуноферментного анализа , предназначенный для обнаружения в сыворотке крови вируссспецифических IgM-антител, в редких случаях - IgG-противокоревых антител.
IgM-ИФА обладает высокой специфичностью и чувствительностью, требует для исследования одного образца, сыворотки. Метод легко осуществим в лабораториях на местах, обеспечивает получение быстрых и достоверных результатов, на которые можно ориентироваться при проведении надзора за корью.
В случае получения сомнительных результатов в IgM-ИФА целесообразно использовать IgG-ИФА, однако при этом необходимо иметь для исследования две сыворотки, полученные от больного в активной фазе заболевания и в период реконвалесценции .
1.1. Техника взятия, маркировка и регистрация проб крови.
Для серологической диагностики кори можно использовать как капиллярную, так и венозную кровь.
Капиллярную кровь берут из пальца в асептических условиях. Перед взятием крови кисть руки пациента согревают горячей водой, затем насухо вытирают чистым полотенцем. Палец, протерев 70 град. C спиртом, прокалывают стерильным скарификатором одноразового пользования. Кровь в количестве 1,5-2,0 мл собирают в стерильную одноразовую центрифужную пробирку . После взятия крови место укола смазывают йодом, а пробирку закрывают резиновой пробкой.
Кровь из вены в количестве 5 мл берут стерильным шприцем в стерильную пробирку в строго асептических условиях, используя для этого специальное помещение, полностью соответствующее санитарно-эпидемиологическим требованиям.
На пробирку с кровью следует наклеить этикетку с указанием регистрационного номера, фамилии, имени, даты взятия крови.
При проведении серомониторинга к образцам крови прилагается аккуратно заполненный сопроводительный документ - Список лиц, подлежащих серологическому обследованию , в котором указывают город ; N детского дошкольного учреждения и группы; школы и класса; название вуза, факультета, группы; регистрационный номер ; фамилию и имя пациента; дату рождения; дату вакцинации и ревакцинации ЖКВ; дату взятия крови; подпись ответственного лица.
При обследовании заболевшего корью или подозрительного на эту инфекцию, заполняется Направление в лабораторию регионального центра. Пробы крови направляются в лабораторию вирусологии ЦГСЭН в г. Москве не позднее 48 часов с момента взятия крови .
На месте сбора образцов сывороток крови следует хранить дубликаты списков обследованных лиц и результаты исследования сывороток в течение не менее 1 года.
1.2. Техника первичной обработки крови.
Для получения сыворотки пробирку с кровью оставляют в наклонном положении при комнатной температуре на 30 минут для образования сгустка, после чего пробирку с кровью встряхивают , закрывают пробкой и ставят на ночь в холодильник при температуре 4-8 град. С.
После отделения сыворотки от сгустка ее центрифугируют при 500 g в течение 7-10 минут. Затем сыворотку отсасывают пипеткой в стерильные центрифужные пробирки с обязательным переносом на них этикетки с соответствующей пробирки.
Если в лаборатории нет центрифуги, то цельную кровь надо оставить в холодильнике до тех пор, пока не произойдет полная ретракция сгустка . Осторожно, тщательно избегая повреждения эритроцитов, перенести сыворотку в другую стерильную пробирку, снабженную этикеткой. Сыворотка должна быть прозрачной, светло-желтого цвета, без выраженного гемолиза.
1.3. Транспортировка образцов сыворотки .
Перед транспортировкой собранного материала очень важно принять меры предосторожности: проверить наличие маркировки и сопроводительной документации , прочно закрыть пробирки пробкой, расположить пробы согласно их номерам, уложить сыворотки в пластиковый пакет.
Для транспортировки крови следует использовать термоконтейнеры . Если используются холодильные элементы , то положите их на дно и по бокам контейнера , а затем внутрь поместите пластиковый пакет с образцами сыворотки, а сверху вновь положите замороженные элементы. Сопроводительные документы , указав время и дату отправления, поместите в полиэтиленовый пакет, положите его под крышку термоконтейнера или коробки.
Когда приготовления к отправке будут закончены, проинформируйте получателя о времени и способе транспортировки.
1.4. Обработка медицинского инструментария.
Обработка лабораторного инструментария и перевязочного материала, а также сбор и утилизация отходов медицинского назначения осуществляются в соответствии с действующими нормативными документами.

2. Сбор, транспортировка и хранение вируссодержащих образцов

В ходе реализации эпиднадзора за корью на этапе ее элиминации необходимо наладить слежение за циркуляцией вируса с помощью идентификации штаммов вируса кори и генетической характеристики вирусных изолятов.
Вирус кори можно выделить в продромальной стадии заболевания и в стадии высыпания из различных материалов от больного: из мочи, назофарингиальных секретов и из лимфоцитов периферической крови. Интенсивность экскреции вируса быстро падает. Обнаружение и идентификация вируса кори на культуре клеток занимает несколько недель. Эти исследования должны проводиться на базе Национального центра по надзору за корью для слежения за биологическими свойствами циркулирующих на территории России штаммов вируса кори.
Выделение изолятов вируса кори позволяет в дальнейшем проводить их генетический анализ и сравнивать штаммы, полученные из различных мест в разные годы. Таким образом, можно получить исчерпывающую информацию об их происхождении и проследить пути передачи вируса. Для проведения молекулярно-эпидемиологического анализа надо иметь коллекции местных штаммов вируса из эндемичных стран.
Выделение вируса - это достаточно дорогостоящий и трудоемкий метод, который занимает много времени и требует наличия вирусологической лаборатории, оборудованной специально для работы с культурами клеток и выделения вирусов. Вирус кори чрезвычайно чувствителен к повышению температуры. Поэтому образцы материалов, предназначенные для выделения вируса, должны быть транспортированы в лабораторию как можно быстрее и в условиях строгого соблюдения холодовой цепи.
2.1. Сбор, транспортировка и хранение образцов мочи.
Для исследования берут пробы мочи в объеме 10-50 мл. Целесообразно использовать первую утреннюю порцию мочи, содержащую большее число эпителиальных клеток, из которых, как правило, и выделяется вирус кори. Наиболее успешно удается выделение вируса из образцов мочи, полученных на самых ранних стадиях болезни - в момент появления сыпи и максимум в течение 5 дней от момента высыпания.
Мочу собирают в стерильную емкость, охлаждают до 4-8 град. C, центрифугируют в ближайшие несколько часов после забора. Центрифугирование проводят при 500 g в течение 5 мин при 4 град. C. Надосадочную жидкость выливают, а осадок ресуспендируют в 1 мл вирусной транспортной среды или питательной среды для культур клеток .
Ресуспендированный осадок может храниться при температуре 4 град. C не более 48 часов перед доставкой его в Национальный центр по надзору за корью или другую лабораторию, занимающуюся молекулярно-генетическим типированием вируса кори. В противном случае осадок должен быть заморожен в транспортной вирусной среде при -70 град. C и отправлен с сухим льдом в герметично закрытых пробирках, предохраняющих этот осадок от воздействия углекислого газа.
В герметично закрытых емкостях при 4 град. C можно транспортировать образцы цельной мочи, но лучше мочу отцентрифугировать в течение 24 часов после сбора и транспортировать ресуспендированный осадок.
Ресуспендированный осадок не следует замораживать, если можно его отправить на исследование в течение ближайших 48 часов.
Образцы мочи не следует замораживать до окончания процедур концентрирования.
2.2. Сбор, транспортировка и хранение назофарингиальных образцов.
Назофарингиальные образцы должны быть взяты у больного как можно раньше, не позднее пятого дня с момента появления сыпи. В это время в этих образцах будет наиболее высокая концентрация вируса.
Назофарингиальные образцы могут быть взяты у больного одним из следующих способов, перечисленных в порядке возможности выделения вируса:
- аспирация носового секрета. Производится путем введения в нос 2-3 миллилитров стерильного физиологического раствора шприцем через надетый на него тонкий резиновый зонд, после чего жидкость отсасывают и помещают в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой, в которой находится специальная транспортная среда для вирусов;
- полоскание . Со слизистых оболочек носоглотки получают путем полоскания горла небольшим количеством физиологического раствора ; промывные воды вносят в транспортную среду для вирусов;
- назофарингиальные смывы. Для взятия используют ватный тампон, которым протирают слизистую оболочку носоглотки с достаточным усилием, чтобы снять часть эпителиальных клеток. Тампоны помещают в маркированные стерильные пробирки с завинчивающимися крышками, в которых содержится 2-3 мл транспортной среды для вирусов.
Образец носового секрета, взятого любым из перечисленных выше способов и помещенный в вирусологическую транспортную среду <*>, должен быть доставлен для исследования в течение 48 часов на холоде . Если условия не позволяют быстро отправить образец смыва из носоглотки, пробирку с тампоном следует энергично встряхнуть так, чтобы смыть клетки, а затем извлечь тампон. Назальные аспираты или смывы центрифугируют при температуре 4 град. С при 500 g в течение 5 минут, затем осадок ресуспендируют в 2 мл питательной среды для клеточных культур. Ресуспендированный осадок и надосадочную жидкость хранят раздельно при температуре -70 град. C и транспортируют в лабораторию на сухом льду в герметично закрытых флаконах, чтобы избежать попадания в них углекислоты.
Поскольку вероятность выделения вируса максимальна в первые 3 дня с момента появления сыпи, не следует задерживаться со сбором клинического материала для изоляции вируса; не ожидать результатов лабораторного подтверждения клинического диагноза кори.

Примечание:
1. Транспортная среда для выделения вирусов:
Основной раствор Хенкса pH 7,4 с ХЕПЕС буфером .
Бычий сывороточный альбумин - 2,0 г.
Раствор пенициллина со стрептомицином - 1,0 мл.
Феноловый красный 0,4%-ный раствор - 0,2 мл.
Растворите 2,0 г бычьего сывороточного альбумина в 100 мл дистиллированной воды. Добавьте к 80 мл дистиллированной воды 10 мл раствора Хенкса, затем добавьте 10 мл 2%-ного раствора бычьего сывороточного альбумина и 0,2 мл раствора фенолового красного. Стерилизуйте фильтрованием. Добавьте 1 мл раствора пенициллина со стрептомицином, разлейте в стерильные флаконы и храните при 4 град. C.
2. Раствор пенициллина со стрептомицином.
Кристаллический пенициллин С.
Стрептомицин сульфат.
Растворите 10 в 6 ЕД пенициллина и 1,0 г стрептомицина в 100 мл стерильного ФБР.
Разлейте во флаконы по 5 мл и храните при -20 град. C. Добавление 1 мл этого раствора к 100 мл питательной среды позволяет получить раствор с окончательной концентрацией 1200 ГД пенициллина и 100 мкг стрептомицина в 1 мл раствора.
3. Доставка вируссодержащих образцов в Национальный центр осуществляется по запросу Национального центра с заполнением части А Направления в лабораторию Московского регионального центра эпиднадзора за корью.